病毒是一種個(gè)體微小結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，只含一種核酸（DNA或RNA），必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型生物。

病毒是一種非細(xì)胞生命形態(tài)，它由一個(gè)核酸長(zhǎng)鏈和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成，病毒沒(méi)有自己的代謝機(jī)構(gòu)，沒(méi)有酶系統(tǒng)。因此病毒離開(kāi)了宿主細(xì)胞，就成了沒(méi)有任何生命活動(dòng)、也不能獨(dú)立自我繁殖的化學(xué)物質(zhì)。

常見(jiàn)的病毒樣本保存液的設(shè)計(jì)或針對(duì)于核酸的保護(hù)，或指向病毒功能蛋白的保護(hù)。

針對(duì)核酸的樣本保存液中，通常含有DNase/RNase和其他功能酶的抑制作用，破壞功能蛋白，這一類(lèi)病毒樣本保存緩沖液更適用于pcr方法或其他分子檢測(cè)方法的使用。

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而主要保護(hù)功能蛋白的病毒樣本保存液，對(duì)于核酸的保護(hù)效果不佳，更適用于病毒抗原或抗體的檢測(cè)，比如elisa或膠體金、熒光等快速檢測(cè)的使用。

1、滅活型病毒保存液和非滅活型病毒保存液

病毒保存液主要分滅活型病毒保存液和非滅活型病毒保存液。

1）非滅活型病毒保存液

非滅活型的病毒保存溶液不含裂解鹽，可以保持病毒的體外活性以及抗原和核酸的完整性，保持不分解病毒蛋白包膜，并保持病毒樣品的原始性程度。除核酸提取和檢測(cè)外，它還可用于病毒培養(yǎng)和分離。

非滅活病毒保存液的成分主要以Hank's液為基礎(chǔ)，在Hank's液基礎(chǔ)上，添加了很多抑菌成分、冷凍保護(hù)劑等成分。

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Hank's平衡鹽溶液（Hank's Balanced Salt Solution, HBSS）是細(xì)胞分離或培養(yǎng)中常用的磷酸鹽緩沖液之一，主要成分包括NaCl、KCl、KH₂PO₄、Na₂HPO₄、NaHCO₃、CaCl₂、MgCl₂、MgSO₄和葡萄糖。Hank's平衡鹽溶液常用于組織塊的漂洗、細(xì)胞的洗滌、細(xì)胞或組織的運(yùn)輸、其他試劑的配制以及作為細(xì)胞計(jì)數(shù)的稀釋液等。

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平衡鹽溶液（Balanced Salt Solution, BSS）也叫生理溶液（Physiological Solution），是集緩沖液的緩沖力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)特點(diǎn)于一體的，具有維持滲透壓、保持PH穩(wěn)定以及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)的作用，可滿(mǎn)足體外實(shí)驗(yàn)中組織、器官或細(xì)胞的生存和代謝的基本需要。一些平衡鹽溶液中還添加了少量酚紅，用以指示溶液的酸堿度變化。

2）滅活型病毒保存液

滅活型病毒保存液添加有裂解鹽，可以降解樣本病毒，使其失去活性，可以有效地防止操作員繼發(fā)感染。

保存液里面含有的Tris、裂解鹽、EDTA等主要目的是裂解核酸而釋放出核酸，從而通過(guò)后續(xù)的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR進(jìn)行核酸檢測(cè)，以此判斷樣本是否含病毒特征核酸，即是否感染病毒。

它還包含抑制劑可以防止病毒核酸降解，以便進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)，并且可以在室溫下保存相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間，從而節(jié)省了病毒樣品的保存和運(yùn)輸成本。

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滅活型病毒保存液則使用上更安全，操作環(huán)境要求也不用那么嚴(yán)格。

3、非滅活型病毒保存液的成分及作用

目前研究的病毒保存液的成分主要為Hank's液基礎(chǔ)、慶大霉素、真菌抗生素、BSA（牛血清白蛋白第五組分）、生物緩沖劑HEPES、氨基酸、冷凍保護(hù)劑、甘油等多種組分

1）純化水

純化水，H?O。純化水在病毒保存液中的主要作用是作為溶劑，提供一個(gè)適宜的介質(zhì)用于稀釋和混合其他成分，同時(shí)也有助于維持保存液的pH值在一個(gè)理想的范圍內(nèi)，這有助于維持病毒的穩(wěn)定性。

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2）葡萄糖

葡萄糖，分子式C?H??O?。葡萄糖在病毒保存液中的添加主要是為了提供一個(gè)穩(wěn)定的能量來(lái)源，幫助維持樣本中可能存在的細(xì)胞的生存狀態(tài)，從而間接保護(hù)病毒的活性。

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葡萄糖也可以幫助調(diào)節(jié)保存液的滲透壓，維持一個(gè)適宜的環(huán)境，防止細(xì)胞因環(huán)境壓力變化而發(fā)生破裂或收縮。

3）甘油

甘油，分子式C?H?O?。甘油在病毒保存液中的添加主要是為了提供冷凍保護(hù)，防止樣本在低溫保存和運(yùn)輸過(guò)程中病毒受損，具有穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用，可以防止病毒蛋白在低溫或者是不穩(wěn)定環(huán)境中變性或聚集，從而保持病毒的感染能力。

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4）氯化鈉

氯化鈉，NaCl。氯化鈉在病毒保存液中的添加主要是為了調(diào)節(jié)溶液的滲透壓和離子強(qiáng)度，從而提供一個(gè)適宜的環(huán)境以維持病毒的穩(wěn)定性和活性。

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5）蔗糖

蔗糖，分子式C??H??O?? 。蔗糖在病毒保存液中的添加通常是為了提供冷凍保護(hù)和穩(wěn)定病毒顆粒，從而保持病毒的結(jié)構(gòu)和感染活性。

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6）檸檬酸鈉

檸檬酸鈉，分子式是C?H?Na?O?。檸檬酸鈉在病毒保存液中的添加主要是因?yàn)樗木彌_能力和對(duì)金屬離子的螯合作用。

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7）十二烷基肌氨酸鈉

十二烷基肌氨酸鈉，分子式C??H??NNaO?。十二烷基肌氨酸鈉在病毒保存液中主要用于增強(qiáng)病毒核酸的提取效率，減少病毒的感染性，以及提高樣品的處理性能，它是病毒學(xué)研究和診斷中常用的添加劑之一。

8）酚紅

酚紅能夠通過(guò)顏色的變化來(lái)指示溶液的pH變化。在酸性條件下，酚紅呈現(xiàn)黃色；在中性和堿性條件下，它呈現(xiàn)紅色到粉紅色。這種顏色變化可以幫助研究人員監(jiān)控保存液的pH狀態(tài)，確保其處于適宜病毒保存的范圍內(nèi)。

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雖然酚紅的主要功能是作為pH指示劑，但它本身并不調(diào)節(jié)pH值，而是用來(lái)監(jiān)測(cè)和指示pH狀態(tài)。酚紅對(duì)細(xì)胞有一定毒性，在一些特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)置中，如果存在對(duì)酚紅敏感的應(yīng)用（例如某些細(xì)胞培養(yǎng)或分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)），可能需要考慮使用不含酚紅的保存液或培養(yǎng)基。

9）慶大霉素、真菌抗生素

多種抗生素聯(lián)合，具有抗細(xì)菌和抗真菌的作用。

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10）牛血清白蛋白

牛血清白蛋白（BSA）作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點(diǎn)為4.7。

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牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，可在病毒的蛋白質(zhì)外殼形成一種保護(hù)膜，使其不易分解，保證病毒的完整性，提高分離率；還可在western blot中作為Blocking agent；在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA，通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性。

11）氨基酸

為病毒存活提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

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4、滅活病毒保存液的成分及作用

滅活病毒保存液相對(duì)于非滅活病毒保存液，主要是多了硫氰酸胍。

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a.病毒裂解

硫氰酸胍是一種有效的裂解劑，可以破壞病毒的蛋白質(zhì)外殼和脂質(zhì)包膜，從而釋放出病毒的遺傳物質(zhì)（RNA或DNA）。這一點(diǎn)對(duì)于后續(xù)的病毒核酸的提取和分析至關(guān)重要。

b.核酸穩(wěn)定性

在裂解病毒并釋放出遺傳物質(zhì)后，硫氰酸胍有助于穩(wěn)定這些敏感的分子，防止它們?cè)跇悠诽幚砗痛鎯?chǔ)過(guò)程中被降解。硫氰酸胍通過(guò)破壞核酸降解酶的活性來(lái)保護(hù)核酸免受破壞。

c.抑制核酸酶活性

硫氰酸胍能夠有效抑制核酸酶的活性，這些酶如果活躍會(huì)迅速降解釋放出的RNA或DNA。通過(guò)抑制這些酶，硫氰酸胍?guī)椭３趾怂岬耐暾?，這對(duì)于確保病毒檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度至關(guān)重要。

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